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C4色譜柱在使用前,請先進行柱的性能測試

更新時間:2022-11-16      點擊次數:605
  C4色譜柱是一款適合于蛋白質分離分析用的產品。它使用3微米粒徑的硅膠填料,優化了孔徑,固定相配體的烷基鏈長及表面鍵合密度,可實現高分辨率和高回收率的分析。使用短柱可以在高流速下實現快速分析。
 

 

  C4色譜柱在使用前,先進行柱的性能測試,并將結果保存起來,作為今后評價柱性能變化的參考。
  在做柱性能測試時要按照C4色譜柱出廠報告中的條件進行,只有這樣,測得的結果才有可比性。但要注意柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
  1、樣品的前處理:
 ?、傧仁褂昧鲃酉嗳芙鈽悠?;
 ?、谑褂妙A處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質;
 ?、凼褂?.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質。
 
  2、流動相的配制:
  液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點:
 ?、倭鲃酉鄬悠肪哂幸欢ǖ娜芙饽芰?,保證樣品組分不會沉淀在柱中;
 ?、诹鲃酉嗯c樣品不產生化學反應;
 ?、哿鲃酉嗟酿ざ纫M量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命;
 ?、芰鲃酉嗟奈锘再|要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器,最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制;
 ?、萘鲃酉喾悬c不要太低,否則容易產生氣泡,導致實驗無法進行;
 ?、拊诹鲃酉嗯渲坪煤?,一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。
 
  3、流動相流速的選擇:
  因柱效是柱中流動相線性流速的函數,使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的C4色譜柱,要追求較佳柱效,使用較佳流速。對內徑為4.6mm的C4色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
  當選用較佳流速時,分析時間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆姸鹊姆椒ㄒ钥s短分析時間。
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