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反相色譜柱:一種高效液相色譜分離技術

更新時間:2023-10-25      點擊次數:263
  反相色譜柱是一種常用的高效液相色譜(HPLC)分離技術,主要用于分離和分析極性或中等極性的化合物,如氨基酸、蛋白質、多肽、核酸等。該色譜柱具有較高的分離效率和良好的峰形,是生物樣品分離和分析中常用的技術之一。
 
  它的原理:
  反相色譜柱的原理是基于不同化合物在固定相和流動相之間的分配平衡。反相色譜柱的固定相通常是由硅膠或聚合物顆粒制成,表面鍵合有疏水基團,如C8、C18等。在反相色譜中,流動相為極性溶劑,如水、甲醇、乙腈等,而固定相的疏水基團與流動相中的溶劑分子相互作用,使得不同化合物在固定相和流動相之間的分配達到平衡。由于不同化合物的疏水性質和極性不同,它們在色譜柱上的保留時間和洗脫順序也會有所不同,從而實現分離。
 

 

  它的選擇和使用:
  反相色譜柱的選擇和使用對于樣品的分離和分析結果至關重要。以下是選擇和使用它時需要注意的事項:
  1.固定相和鍵合相的選擇:根據需要分離的化合物性質選擇適合的固定相和鍵合相。對于極性較大的化合物,可以選擇C18或C8鍵合相;對于極性較小的化合物,可以選擇C3或C4鍵合相;
  2.流動相的選擇:根據需要分離的化合物性質選擇適合的流動相。常用的流動相包括水、甲醇、乙腈等。還可以加入調節劑,如甲酸銨、乙酸銨等,以改善分離效果;
  3.流速和進樣量:適當調整流速和進樣量可以提高分離效果。通常,流速越慢,分離效果越好;進樣量應根據色譜柱容量和分離效果來選擇;
  4.溫度:溫度可以影響化合物的溶解度和擴散速率,從而影響分離效果。通常,升高溫度可以加快分離速度,但也會影響化合物的保留時間和峰形。
 
  總之,反相色譜柱是一種常用的高效液相色譜分離技術,具有較高的分離效率和良好的峰形。
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